TY  - THES
T1  - Charakterisierung von Substraten der Rezeptoren des nukleocytoplasmatischen Transports in Saccharomyces cerevisiae
A1  - Zengerly,Iris
Y1  - 2008/05/29
N2  - Der Transport von Proteinen und RNA in und aus dem Zellkern erfolgt in der Hefe Saccharomyces cerevisiae mit Hilfe von 14 löslichen Importin beta-homologen Transportrezeptoren und einigen weiteren Faktoren, die den Ablauf der Translokation unterstützen. In dieser Arbeit wurden die Importrezeptoren Kap95, Kap114 und Kap120, daneben der Exportfaktor Cse1 sowie das Adapterprotein Srp1 und der GTPase-Koaktivator Yrb1 biochemisch bzw. molekularbiologisch untersucht. In vitro wurden diverse Interaktionspartner für diese Proteine detektiert. Insbesondere die Replikationsfaktor C-Untereinheit Rfc2 wurde als Substrat für den heterodimeren Importkomplex Srp1/Kap95 (Importin alpha/Importin beta) näher charakterisiert. Dieser Komplex schleust typischerweise Substrate mit einer basischen Kernlokalisierungssequenz über den Kernporenkomplex in den Zellkern, wo er unter Mitwirkung von Gsp1-GTP und Nup2 disassembliert. Rfc2 wurde zunächst als endogener Komplex mit Kap114 aus Hefe-Cytosol isoliert. Da jedoch die Deletion des KAP114-Gens in der Zelle keine Wirkung auf den nukleären Import des Proteins zeigte, wurde in Bindungsstudien mit rekombinant in E. coli hergestellten und gereinigten Proteinen die Affinität dieses Substrates zu verschiedenen Importrezeptoren untersucht. Es zeigten sich schwache bis mäßig starke Interaktionen zwischen Rfc2 und Kap114, Nmd5, Kap120, Kap95, Pse1, Kap104 sowie Sxm1. Die Zugabe von Srp1 zu Kap95 verstärkte die Bindung. In verschiedenen temperatursensitiven SRP1- und KAP95-Hefe-Mutanten wurden in vivo Defekte im Import von Rfc2 nachgewiesen. Vier basischen Aminosäureresten im N-terminalen Bereich wurden als eine monopartite klassische Kernlokalisierungssequenz identifiziert.
KW  - Kernproteine
KW  - Saccharomyces cerevisiae
KW  - Rfc2
KW  - Importin alpha
KW  - Importin beta
CY  - Saarbrücken
PB  - Universitäts- und Landesbibliothek
AD  - Postfach 151141, 66041 Saarbrücken
UR  - http://scidok.sulb.uni-saarland.de/volltexte/2008/1590
ER  -