TY  - THES
T1  - MMPace - ein hefezellbasierter Bioassay zur Hochdurchsatz-Testung spezifischer Inhibitoren gegen humane Matrix-Metalloproteasen
A1  - Diehl,Björn
Y1  - 2008/12/15
N2  - Diverse Krankheitsbilder, wie Diabetes mellitus, Arthritis oder Krebs, gehen häufig mit einer fehlerhaften Regulation von Matrix-Metalloproteasen, insbesondere MMP-2 und MMP-9, einher. Die Validierung neuartiger Hemmstoffe wird vor allem durch den hohen Kostenaufwand bei der Isolierung der benötigten MMPs aus Tumor-Zelllinien oder Fibroblasten erschwert. Vor diesem Hintergrund wurde in der vorliegenden Arbeit ein zellbasierter MMP-Bioassay für ein Hochdurchsatz-Screening nach potentiellen Inhibitoren etabliert, der auf der heterologen Expression und Immobilisierung von MMP-2 und MMP-9 auf der Zellwand von Hefen basiert. Zur Identifikation eines geeigneten Expressionswirts wurden die humanen Gelatinasen in den Hefen K. lactis, P. pastoris, S. cerevisiae, S. pombe und Z. bailii zur Sekretion gebracht. Dabei war P. pastoris als einziger Organismus in der Lage, beide MMPs in ausreichend hoher Qualität als biologisch aktive Enzyme zu produzieren. Im Rahmen vergleichender Experimente zur Zellwand-Expression in P. pastoris konnte mit Sed1p aus S. cerevisiae ein hoch effizientes, neuartiges Zelloberflächen-Expressionssystem für P. pastoris identifiziert werden, das die für S. cerevisiae maximal erreichbare Immobilisierungs-Effizienz um den Faktor 6,7 übertrifft. Die Anpassung eines kommerziell erhältlichen Gelatinase-Assays an die Anforderungen eines zellbasierten Systems ermöglichte einen quantitativen Vergleich der Hemmstoff-Wirkungen durch ein einfaches, standardisiertes Messverfahren.
KW  - Heterologe Genexpression
KW  - Pichia
CY  - Saarbrücken
PB  - Universitäts- und Landesbibliothek
AD  - Postfach 151141, 66041 Saarbrücken
UR  - http://scidok.sulb.uni-saarland.de/volltexte/2008/1974
ER  -