TY  - THES
T1  - Untersuchungen zu einem neuartigen Abbauweg der 1,5-Anhydro-D-fructose  in Rhizobien an dem Modellorganismus Sinorhizobium meliloti 1021 : Klonierung und Charakterisierung der beteiligten Enzymsysteme
A1  - Stosik,Beata
Y1  - 2009/02/04
N2  - Im Rahmen dieser Arbeit wurde der Abbauweg des neuartigen Zuckers 1,5-Anhydro- D-fructose (1,5-AF) in Sinorhizobium meliloti 1021, einem Modellbakterium dessen  Genomsequenz bekannt ist, aufgeklärt. Die beteiligten Enzyme Anhydrofructose-  Reduktase (AFR) und eine P450-Monooxygenase (CYP) wurden in Zellextrakten  nachgewiesen und charakterisiert. Die postulierten Reaktionen wurden mit den  rekombinanten Enzymen in vitro verifiziert. Der erste Reaktionsschritt wird durch  AFR katalysiert, die 1,5-AF stereoselektiv zu 1,5-Anhydro-D-mannitol (1,5-AM)  reduziert. Die AFR aus S. meliloti 1021 ist ein dimeres, strikt NADPH-abhängiges  Enzym 74,1 kDa und hat 80 % Sequenzidentität zu AFR aus S. morelense S-30.7.5.  Die für S. morelense S-30.7.5 postulierte Hydroxylierung von 1,5-AM an C-1 zu D-  Mannose durch ein CYP-System konnte experimentell bestätigt werden. Zwei putativ  für CYP kodierende ORFs wurden aus S. meliloti kloniert und charakterisiert. Nur die  aus dem ORF Y01812 erhaltene Monooxygenase konnte in aktiver Form exprimiert  werden. Für den Elektronentransfer von NADH auf die MO1812 wurden aus  P. putida die Gene der Putidaredoxin-Reduktase (camA) und des Putidaredoxins  (camB) kloniert und mit der MO1812-(His)6 fusioniert. Im Test mit 1,5-AM war das  Fusionsprotein aktiv. Die Beteiligung der Monooxygenase an dem Abbauweg von  1,5-AF in S. meliloti 1021 wurde zusätzlich durch Deletion des Gens Y01812  verifiziert, wobei die Fähigkeit des Bakteriums zum Wachstum auf 1,5-AF verloren  ging.
KW  - Anhydrofructose-Reductase <1,5-Anhydro-D-Fructose-Reductase>
KW  - Rhizobium meliloti
CY  - Saarbrücken
PB  - Universitäts- und Landesbibliothek
AD  - Postfach 151141, 66041 Saarbrücken
UR  - http://scidok.sulb.uni-saarland.de/volltexte/2009/2069
ER  -