TY  - THES
T1  - Methodenentwicklung zur Bestimmung von intakten Proteinen und Proteomen
A1  - Hügel,Manuela
Y1  - 2009/07/02
N2  - Die Untersuchung der Zusammensetzung von Proteomen umfasst die Identifizierung und Quantifizierung aller Proteine innerhalb einer Zelle, eines Gewebes oder einer biologischen Flüssigkeit zu einem bestimmten Zeitpunkt und unter genau definierten Bedingungen. Analytische Methoden zur Untersuchung dieser heterogenen Proben müssen aufgrund der immensen Komplexität und des großen dynamischen Konzentrationsbereiches der Proteine (bis 1:10^10) sehr effiziente Trennungen der Proteine in Kombination mit sehr nachweisstarken Detektionsmethoden aufweisen. Im Rahmen dieser Arbeit wurden verschiedene chromatographische Methoden speziell zur Trennung von intakten Proteinen entwickelt und optimiert. Hierzu wurde die Ionenpaar-Umkehrphasen mikro-Hochleistungsflüssigchromatographie (IP-RP-mikro-HPLC) gewählt. Die Detektion der Proteine wurde durch Massenspektrometrie(MS) unter Verwendung von Flugzeit-(TOF) oder Ionenfallen Massenanalysatoren gewährleistet. Außerdem wurde eine Chromatofokussierungs-Methode entwickelt und optimiert, mit der in Kopplung mit der beschriebenen IP-RP-mikro-HPLC-TOF-MS-Methode die multidimensionale Analyse von komplexen Proteomen auf der Ebene der intakten Proteine möglich war. Alle entwickelten HPLC- und MS-Methoden wurden auf Reproduzierbarkeit, Stabilität sowie Orthogonalität getestet. Sie wurden angewendet zur Charakterisierung glycosylierter Proteine sowie zur Trennung und Detektion von Proteinen aus menschlichem Serum und einem Escherichia coli-Lysat. Außerdem wurden Molkeproben und ein Gliadinextrakt aus Weizenmehl qualitativ und quantitativ untersucht.
KW  - Proteine
KW  - Proteomanalyse
KW  - HPLC-MS
KW  - Mikrosäulen-Flüssigkeitschromatographie
KW  - Elektronensprayionisations-Massenspektrometrie
KW  - Multivariate Analyse 
CY  - Saarbrücken
PB  - Universitäts- und Landesbibliothek
AD  - Postfach 151141, 66041 Saarbrücken
UR  - http://scidok.sulb.uni-saarland.de/volltexte/2009/2195
ER  -