TY  - THES
T1  - Expression der Galaktitol-Dehydrogenase in Rhodobacter sphaeroides D und Herstellung von aktiven Mutationen zur Immobilisierung auf Goldelektroden
A1  - Kornberger,Petra
Y1  - 2010/01/07
N2  - Die konstitutive Expression der Galaktitol-Dehydrogenase in der gain of function Mutante Rhodobacter sphaeroides D ist auf eine Sequenzverdopplung von 21 Nukleotiden upstream vom Gen zurückzuführen, was als Effekt die Bindung eines GntR-Regulatorproteins als Repressor verhindern oder die Einführung einer neuen Promotorsequenz erlauben würde. Die Untersuchungen zeigen, dass mit hoher Wahrscheinlichkeit der neue Promotor für die Transkription verantwortlich ist. Die Strukturrelevanz von Mg2+-Ionen für die Bildung katalytisch aktiver GatDH-Tetramere konnte durch eine Variante nachgewiesen werden, die C-terminal um die drei Mg2+ komplexierenden Aminosäuren verkürzt war. Die Variante zeigte keine Aktivität mehr und neigte bei der Anreicherung zur Aggregatbildung, was eine ungeordnete Zusammenlagerung der Monomere belegt und eine strukturelle Untersuchung verhinderte. Zur gerichteten Immobilisierung an Goldelektroden wurde die GatDH mit einem N-terminalen Cystein-Tag versehen. Diese Variante wurde mit einer Ausbeute von über 4400 U/l exprimiert und bis zu einer Reinheit von 12,2 U/mg angereichert. Eine SPRMessung bewies die feste Bindung des Enzyms an die Goldoberfläche als Monolayer und CV-Messungen belegten katalytische Aktivität. Diese neuartige Enzymimmobilisierung ist die Grundlage für die Entwicklung eines Enzymreaktors mit elektrochemischer Cofaktor Regenerierung zur enantiomerenreinen Feinchemikalien-Herstellung mit immobilisierten Enzymen, Cofaktoren und Mediatoren.
KW  - Immobilisiertes Enzym
KW  - Genregulation
KW  - Rhodobacter sphaeroides
CY  - Saarbrücken
PB  - Universitäts- und Landesbibliothek
AD  - Postfach 151141, 66041 Saarbrücken
UR  - http://scidok.sulb.uni-saarland.de/volltexte/2010/2695
ER  -