TY  - THES
T1  - Endozytose und intrazellulärer Toxintransport in Hefe- und Säugerzellen mittels fluoreszenzmarkierter K28-Varianten
A1  - Gießelmann,Esther
Y1  - 2012/01/04
N2  - Das Toxin K28 wird von virusinfizierten Killerstämmen der Hefe Saccharomyces cerevisiae sekretiert und ist als alpha/beta-Heterodimer ein Mitglied der A/B Toxin-Familie. Nach Bindung an die Oberfläche sensitiver Zielzellen wird K28 durch Rezeptor-vermittelte Endozytose aufgenommen und retrograd durch den Sekretionsweg in das Zytosol transportiert. Dort wird die beta-Untereinheit proteasomal abgebaut, während alpha im Zellkern einen G1/S Zellzyklus-Arrest und schließlich den Zelltod auslöst. Die K28-Aufnahme und der intrazelluläre Transport werden durch den zellulären HDEL-Rezeptor Erd2p bestimmt, der die Zielsteuerung des Toxins von der Plasmamembran zum sekretorischen Weg der infizierten Zelle sicherstellt. Daher stellt K28 ein geeignetes Modell-Cargo zur Untersuchung der Endozytose in eukaryotischen Zellen dar. Um das Toxin-Trafficking aufzuklären, wurden biologisch aktive K28/mCherry-Fusionen in Pichia pastoris exprimiert und zur Verfolgung der Toxinbindung an die Hefezelle in vivo eingesetzt. Dabei stellte sich die beta-Untereinheit als Zellwand-bindende Komponente heraus. Die Plasmamembranlokalisation und die endozytotische Aufnahme des K28-Rezeptors Erd2p wurden durch fluoreszenzbasierte Kolokalisationstudien und quantitative Mobilitätsbestimmungen bestätigt. Die Erd2p-Endozytose wird durch mehrere Mechanismen reguliert, darunter der AP-2 Komplex, der zur K28-Aufnahme erforderlich ist und das erste Beispiel einer Beteiligung von AP-2 Komponenten an der Endozytose in Hefe darstellt.
KW  - Endocytose
KW  - Saccharomyces cerevisiae
KW  - Killertoxin
KW  - Fluoreszenz
CY  - Saarbrücken
PB  - Universitäts- und Landesbibliothek
AD  - Postfach 151141, 66041 Saarbrücken
UR  - http://scidok.sulb.uni-saarland.de/volltexte/2012/4542
ER  -