Histomorphologie und Verteilung von TRPC6 in pathophysiologischen Schlüsselregionen des Herzens : eine Untersuchung an menschlichem Gewebe

Abstract

Einige Lokalisationen des menschlichen Herzens stehen mit bestimmten Pathologien dieses Organs in Verbindung. So zum Beispiel der Übergang der linken unteren Pulmonalvene auf den linken Vorhof in Bezug auf Entstehung und Therapie von Vorhofflimmern oder das linke Herzohr als möglicher Ausgangspunkt von Thromben. Der nicht selektive Kationenkanal TRPC6, welcher zur Familie der transient receptor potential (TRP)-Kanäle gehört, ist mit physiologischen und pathologischen Prozessen, wie Hypertrophie, im Herzen assoziiert. Ziel dieser Arbeit war es daher, das TRPC6-Protein in klinisch relevanten Lokalisationen des menschlichen Herzens nachzuweisen und Aussagen über seine Verteilung treffen zu können. Zu diesem Zweck wurden Proben aus fünf fixierten Körperspendern entnommen, wobei es sich bei den präparierten Bereichen um das rechte Herzohr, die Einmündung der linken unteren Pulmonalvene auf den linken Vorhof, das proximale Interventrikuläre Septum, den linken anterioren Papillarmuskel und die Trabecula septomarginalis handelte. Nachdem anhand grundlegender histologischer Färbungen Aussagen zu Zustand und Morphologie der Proben getroffen werden konnten, folgte der Nachweis des TRPC6-Kanals mittels immunhistochemischer Färbung. Dafür erfolgte zunächst die Applikation eines Primärantikörpers gegen TRPC6, welcher in der Folge von einem Meerrettichperoxidase-konjugierten Sekundärantikörper gebunden wurde. Durch die Inkubation mit 3,3´-Diaminobenzidin (DAB), welches als Substrat der Meerrettichperoxidase diente, konnte der Kanal schließlich in Form von braunen Signalen sichtbar gemacht werden. Bei der Analyse der gefärbten Schnitte zeigte sich eine deutliche Expression des TRPC6-Proteins in den Kardiomyozyten, wohingegen sich das umgebende Bindegewebe weitestgehend TRPC6-negativ darstellte. Es konnten keine Unterschiede in der Verteilung von TRPC6 in den verschiedenen Entnahmestellen festgestellt werden. Es kann somit festgehalten werden, dass der TRPC6-Kanal in Myokardbereichen von klinischer Relevanz exprimiert wird und in diesen gleichmäßig verteilt ist.

Some localizations of the human heart are associated with certain pathologies of the organ. For example, the junction of the left inferior pulmonary vein with the left atrium in relation to the development and therapy of atrial fibrillation or the left heart ear as a possible origin of thrombi. The non-selective cation channel TRPC6, which belongs to the family of TRP channels, is linked with physiological and pathological processes, such as hypertrophy, in the heart. Therefore, the aim of the presented study was to detect the TRPC6 protein in clinically relevant localizations of the human heart and to be able to make statements about its distribution. For this purpose, samples were obtained from five fixed body donors, the dissected areas being the right heart ear, the junction of the left inferior pulmonary vein with the left atrium, the proximal interventricular septum, the left anterior papillary muscle, and the septomarginal trabeculation. After conclusions about the condition and morphology of the specimens could be made based on basic histological staining, the TRPC6 channel was detected by immunohistochemical staining. For this purpose, a primary antibody against TRPC6 was first applied, which was subsequently bound by a horseradish peroxidase-conjugated secondary antibody. Incubation with DAB, which served as a substrate for horseradish peroxidase, finally allowed the channel to be visualized in the form of brown signals. Analysis of the stained sections showed clear expression of TRPC6 protein in the cardiomyocytes, whereas the surrounding connective tissue was widely TRPC6- negative. No differences in the distribution of TRPC6 could be detected in the different sampling sites. Thus, it can be concluded that the TRPC6 channel is expressed in myocardial areas of clinical relevance and is equally distributed in these.